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點擊次數:0 發布時間:2024/7/4 11:28:10
做細胞培養實驗經常會用到血清,血清用不完我們會凍起來下次使用。但相信大家也會發現在融化血清過程中會出現白色的沉淀物質,就會疑惑這種情況是否是血清出現問題。
??首先呢我們要搞清楚血清中絮狀沉淀物是什么,沉淀物包含纖維蛋白和脂蛋白,這是正常特性,不會影響產品性質。要除去沉淀,離心血清(400g,1~2分鐘)或簡單的讓其沉淀在瓶子底部,將血清小心的轉移到另一個無菌瓶里(一般不建議采用過濾的方法除去沉淀,因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾)。大多情況輕輕搖動沉淀并加熱至37℃就會再溶解。所以,使用產品時要搖動并加熱血清至37℃,沉淀會自然消失。
(1)怎樣才能降低沉淀物的發生呢?
1. 解凍血清/分裝凍存時,須規則搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發生。
2. 勿將血清置于37℃太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中許多較不穩定的成份也會因此受到破壞,從而影響血清的品質。
3. 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要無須做此步驟。
(2)使用時常見問題及解決方法:
一、保存血清*zui好的方法
??血清應保存在-5℃至-2O℃,若存放于4℃請勿超過一個月。若無法一次用完一瓶,建議將無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內,再放回冷凍。
二、如何解凍血清不會使產品質量受損
??將血清從冷凍箱取出后,先置于2-8℃冰箱使之溶解,然后在室溫下使之全溶。但必須注意的是,溶解過程中必須規則地搖晃均勻。
三、避免沉淀物的產生
1. 解凍血清時,請按照所建議的逐步解凍法(-2O℃至4℃至室溫),若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃),實驗顯示非常容易產生沉淀物。
2. 解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發生
3. 請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩定的成分也會因此受到損害,而影響血清的質量。
4. 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要無須做此步驟。
5. 若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。
四、如何處理血清解凍后有絮狀沉淀物出現
??想要去除這些絮狀沉淀物,可將血清分裝至無菌離心管內,以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養基內一起過濾。但不建議以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因為它可能會阻塞過濾膜。
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