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恒遠(yuǎn)干貨|對(duì)ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果中顯色淡靈敏度偏低問(wèn)題分析

點(diǎn)擊次數(shù)：14429   發(fā)布時(shí)間：2022/4/24 16:59:12

 當(dāng)完成所有實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行底物TMB溶液顯色，發(fā)現(xiàn)酶標(biāo)板中孔的顯色比較淺，只有微弱的信號(hào)呈現(xiàn)，下面恒遠(yuǎn)生物來(lái)跟大家分析一下可能的原因及解決方法：
1、可能原因：試劑盒未充分平衡
解決方法：試劑盒從2～8℃冰箱取出后打開(kāi)盒蓋，于室溫平衡至少20分鐘，確保所有試劑已平衡至室溫（約25℃）。
 
2、可能原因：樣品不適合做ELISA檢測(cè)
解決方法：樣品一般選擇培養(yǎng)上清、血清、血漿。其他樣品形式可能不適合做ELISA檢測(cè)或者需要優(yōu)化檢測(cè)的條件（例如稀釋液的成分）
 
3、可能原因：酶標(biāo)板在貯存或洗后拍干時(shí)過(guò)分干燥
解決方法：防止板過(guò)于干燥。
 
4、可能原因：包被抗體遭到破壞
解決方法：操作溫和，移液槍不能碰到孔底。
 
5、可能原因：樣本和抗體孵育條件不合適
解決方法：按照說(shuō)明書(shū)條件，建議孵育過(guò)程中全程振蕩孵育。
 
6、可能原因：洗滌浸泡時(shí)間過(guò)長(zhǎng)
解決方法：按照說(shuō)明書(shū)操作，勿人為增加浸泡時(shí)間。
 
7、可能原因：偶聯(lián)HRP試劑污染
解決方法：棄去試劑，重新配置。
 
8、可能原因：錯(cuò)誤的稀釋偶聯(lián)HRP試劑
解決方法：棄去試劑，重新配置。
 
9、可能原因：TMB底物孵育時(shí)間過(guò)短，因非人為因素影響，需要優(yōu)化孵育時(shí)間
解決方法：確定合適的孵育時(shí)間：人為判定-濃度S1出現(xiàn)深藍(lán)色，S4-5有淡藍(lán)色。或機(jī)器判定620 nm波長(zhǎng)下測(cè)定OD值達(dá)到0.6-0.65。
 
10、可能原因：樣本濃度過(guò)高或存在基質(zhì)效應(yīng)
解決方法：建議做不同稀釋倍數(shù)，確認(rèn)樣本稀釋倍數(shù)。
 
11、可能原因：酶標(biāo)儀濾光片設(shè)置有問(wèn)題或者波長(zhǎng)選擇不對(duì)
解決方法：確認(rèn)儀器設(shè)置及選擇正確的波長(zhǎng)檢測(cè)。
 
12、可能原因：酶標(biāo)板不適合做ELISA
解決方法：不能使用細(xì)胞培養(yǎng)板，建議使用ELISA用高吸附力板子
 
總結(jié)為避免顯色淡靈敏度低，需注意以下幾點(diǎn)：
1、 常規(guī)ELISA試劑盒平衡至30min；
2、 檢測(cè)抗體、偶聯(lián)HRP請(qǐng)按說(shuō)明書(shū)稀釋比；
3、 樣本、抗體孵育條件（溫度、轉(zhuǎn)速），請(qǐng)根據(jù)說(shuō)明書(shū)；
4、 控制TMB底物顯色時(shí)間。
 
由于篇幅有限，詳情請(qǐng)“恒遠(yuǎn)生物”微信公眾號(hào)或聯(lián)系我司業(yè)務(wù)員了解哦！

原創(chuàng)作者：上海恒遠(yuǎn)生物技術(shù)發(fā)展有限公司

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