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人半胱氨酸蛋白酶抑制劑elisa試劑盒操作步驟：
實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫（試劑不能直接在 37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻
時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量，如樣品濃度過高時，應對樣品進行稀釋，以使稀釋后的樣品符
合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應的稀釋倍數。
1. 加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測 樣品 100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板 加上蓋或覆膜，37℃反應120 分鐘。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。
2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A 工作液 100μl（在使用前一小時內配制），酶標板加
上覆膜, 37℃反應 60 分鐘。
3. 溫育60 分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3 次，每次浸泡 1-2 分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也
可輕拍將孔內液體拍干）。
4. 每孔加檢測溶液B 工作液（同檢測A 工作液） 100μl，酶標板加上覆膜37℃反應 60 分鐘。
5. 溫育60 分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5 次，每次浸泡 1-2 分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍
將孔內液體拍干）。
6. 依序每孔加底物溶液90μl，酶標板加上覆膜 37℃避光顯色（30 分鐘內，此時肉眼可見標準品的前 3-4
孔有明顯的梯度蘭色，后3-4 孔梯度不明顯，即可終止）。
7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應，此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入
順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。
8. 用酶聯儀在450nm 波長依序測量各孔的光密度（OD 值）。 在加終止液后立即進行檢測。
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