優質的試劑，良好的儀器和正確的操作是保證ELISA 檢測結果準確可靠的必要條件。
ELISA 的操作因固相載體的形成不同而有所差異，國內醫學檢驗一般均用板式點。本文將
敘述板式ELISA 各個操作步驟的注意要點，珠式、管式及磁性球ELSIA ，國外試劑均與
特殊儀器配合應用，兩者均有詳細的使用說明，嚴格遵照規定操作，必能得出準確的結果。
1 標本的采取和保存
可用作ELISA 測定的標本十分廣泛，體液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如
尿液、糞便）等均可作標本以測定其中某種抗體或抗原成份。有些標本可直接進行測定（如
血清、尿液），有些則需經預處理（如糞便和某些分泌物）。大部分ELISA 檢測均以血清為
標本。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份均同等于血清。制備血漿標本需借
助于抗凝劑，而血清標本只要待血清自然凝固、血塊收縮后即可取得。除特殊情況外，在醫
學檢驗中均以血清作為檢測標本。在ELISA 中血漿和血清可同等應用。
血清標本可按常規方法采集，應注意避免溶血，紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性
的物質，以HRP 為標記的ELISA 測定中，溶血標本可能會增加非特異性顯色。
血清標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染，菌體中可能含有內源性HRP ，也會產生假
陽性反應。如在冰箱中保存過久，其中的可發生聚合，在間接法ELISA 中可使本底加深。
一般說來，在5 天內測定的血清標本可放置于4℃，超過一周測定的需低溫冰存。凍結血清
融解后，蛋白質局部濃縮，分布不均，應充分混勻宜輕緩，避免氣泡，可上下顛倒混和，
不要在混勻器上強烈振蕩。混濁或有沉淀的血清標本應先離心或過濾，澄清后再檢測。反
復凍融會使抗體效價跌落，所以測抗體的血清標本如需保存作多次檢測，宜少量分裝冰
存。保存血清自采集時就應注意無菌操作，也可加入適當防腐劑。
2 試劑的準備
按試劑盒說明書的要求準備實驗中需用的試劑。ELISA 中用的蒸餾水或去離子水，包
括用于洗滌的，應為新鮮的和高質量的。自配的緩沖液應用pH 計測量較正。從冰箱中取出
的試驗用試劑應待溫度與室溫平衡后使用。試劑盒中本次試驗不需用的部分應及時放回冰箱
保存。

3加樣
在 ELISA 中一般有3 次加樣步聚，即加標本，加酶結合物，加底物。加樣時應將所加
物加在LEISA 板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產生氣泡。
加標本一般用微量加樣器，按規定的量加入板孔中。每次加標本應更換吸嘴，以免發生
交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測定（如間接法ELISA ）需用稀釋的血
清，可在試管中按規定的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中加入稀釋液，再在其中加入血
清標本，然后在微型震蕩器上震蕩1 分鐘以保證混和。加酶結合物應用液和底物應用液時
可用定量多道加液器，使加液過程迅速完成。
4 保溫
在 ELISA 中一般有兩次抗原抗體反應，即加標本和加酶結合物后。抗原抗體反應的完
成需要有一定的溫度和時間，這一保溫過程稱為溫育（incubation） ，有人稱之為孵育，在
ELISA 中似不恰當。

原創作者：上海恒遠生物技術發展有限公司