：plko.1-trc克隆載體

財團的干擾

1的plko。克隆載體骨干，技術聯盟（券）建了一個圖書館的發夾針對15000人和15000小鼠基因。addgene正與真相與和解委員會使這個狀克隆載體提供給科學界。請舉北陸等人。，2006月；124（6）：1283-98（醫學）在所有出版物引起使用這種載體。

1 plko數碼地圖。

plko。1是一個不稱職的慢病毒載體選擇的真相與和解委員會表達發夾。plko。1可引入細胞通過直接轉染，或可轉換成慢粒子隨后感染的靶細胞系。一經推出，嘌呤霉素抗性標記編碼plko 1允許方便穩定的選擇。

圖1：圖1 plko含有狀插入。原plko.1-trc克隆載體有一1.9kb填充物是由消化上井和限制性。狀核苷酸克隆到上井和限制性網站中的填充物。在上井現場銷毀在大多數情況下（取決于靶序列），而限制性網站保存。一個完整的地圖plko。1載1.9kb填塞，訪問www.addgene.org/10878。

描述向量元素

U 6人U 6啟動子驅動聚合酶轉錄三代狀記錄。

cppt中央polypurine道，cppt，改善傳導效率，促進核進口的載體”的國家的復雜的細胞的轉。

hpgk人力磷酸激酶啟動子驅動表達嘌呤。

嘌呤霉素抗性基因選擇是選擇plko 1質粒在哺乳動物細胞中。

3 ＇＇ltr 3 ＇ ＇鈍長末端重復。

F1山F1細菌復制的起源。

安培的氨芐青霉素抗性基因選擇plko 1質粒在細菌細胞。

市局山市局細菌復制的起源。

5 ＇＇ltr 5 ＇長末端重復。

債轉速反應元件。

圖2：細節狀插入。該U 6啟動子指導核糖核酸轉錄聚合酶三狀。狀包含21個“意義”的基礎是相同的目標基因，一個環包含一個xhoi限制的網站，和21的“反”的基礎，是相輔相成的“意義”基地。狀其次是polyt終止序列聚合酶三。

. 3的相關產品

以下質粒可從addgene建議使用與plko 1 trc-cloning向量。

質粒（addgene身份#）描述

plko。1 -真相與和解委員會的控制（10879）陰性對照載體插入發夾。

plko。1 -爭奪狀（1864）陰性對照載體炒狀。

pspax2（12260）包裝質粒生產病毒顆粒。

pmd2。克（12259）信封質粒生產病毒顆粒。

注：plko。1也可以用來與包裝質粒和pcmv-dr8.2（addgene # 8455）和包膜質粒pcmv-vsvg（addgene # 8454）從羅伯特溫伯格的實驗室。更多信息，訪問addgene ＇的哺乳動物干擾工具頁。

其他幾個實驗室已經plko衍生載體，也可能是有用的實驗。看到這些載體，訪問addgene ＇的網站和搜索”plko”。

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B .設計為1 plko狀寡核苷酸。

B . 1確定*佳21濱海目標在你的基因

選擇合適的21濱海目標基因的步是有效的基因沉默。方法選擇目標的不斷提高。以下是建議為目標的選擇。

1。使用中的選擇工具來確定一組得分的目標，你的基因。例如，懷特海生物醫學研究所主辦了一個基因選擇程序，可以訪問后，免費注冊（網址：/ /侏羅。我。麻省理工學院。”/ bioc / sirnaext /）。如果你有機會，另一個很好的程序irnai，這是免費提供的公司mekentosj（網址：http : / / / www.mekentosj。irnai /）。

總結準則設計的siRNA與有效的基因沉默是包含在這里：

從25nt下游的起始密碼子（球蛋白），搜索21nt序列匹配模式機管局（n19）。如果沒有合適的匹配，搜索納爾（*新）ynn，沒有任何核苷酸，是嘌呤（一，克），并是一個嘧啶（丙，你）。

氣相色譜法的內容應該是36-52 %。

3’端應具有較低的穩定性–至少一一或之間的位置- 19。

避免針對內含子。

避免的4個或多個核苷酸重復，尤其是因為重復polyt是終止信號的核糖核酸聚合酶三。

2。減少退化的目標基因，利用美國的高爐項目。選擇序列，至少有3個核苷酸錯配的所有基因無關。

addgene建議你選擇多目標序列為每個基因。一些序列將乙

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